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HCT116细胞株_HCT116细胞系培养步骤详解
HCT116细胞株是一种人类结肠癌细胞系，广泛应用于癌症研究中。本文将详细介绍HCT116细胞株的培养步骤，以帮助研究人员正确、高效地进行实验。
一、材料准备
在开始培养HCT116细胞株之前，需要准备以下材料：HCT116细胞株、DMEM培养基、胎牛血清、青霉素/链霉素溶液、0.25%胰酶溶液、PBS缓冲液等。
二、细胞解冻
1. 将HCT116细胞株从液氮罐中取出，迅速放入37℃预热的水浴中解冻。
2. 解冻完成后，将细胞转移到50 mL离心管中，并加入相同体积的预温的DMEM培养基。
3. 离心管置于37℃恒温培养箱中，以1000 rpm的速度离心5分钟。
三、细胞培养
1. 将上一步离心后的沉淀重新悬浮在适量的DMEM培养基中，使细胞密度约为1×10^5/mL。
2. 将细胞悬浮液均匀地分配到预先消毒的细胞培养皿中，每个培养皿约加入2 mL细胞悬浮液。
3. 将培养皿置于37℃恒温培养箱中，培养基的体积应保持在培养皿底部的1/2至2/3之间。
4. 培养皿每2-3天更换一次培养基，直至细胞达到80%的密度。
四、细胞传代
1. 当细胞达到80%的密度时，用PBS缓冲液洗涤细胞2次，以去除培养基中的血清成分。
2. 加入适量的0.25%胰酶溶液，轻轻摇晃培养皿使细胞充分接触胰酶。
3. 在37℃恒温培养箱中孵育5分钟，观察细胞的解聚情况。
4. 加入等体积的DMEM培养基，太阳城游戏用移液器轻轻吹洗细胞，使细胞悬浮。
5. 将细胞悬浮液转移到新的培养皿中，加入适量的DMEM培养基，使细胞密度约为1×10^5/mL。
五、细胞冻存
1. 当细胞达到80%的密度时，用PBS缓冲液洗涤细胞2次。
2. 加入适量的0.25%胰酶溶液，轻轻摇晃培养皿使细胞充分接触胰酶。
3. 在37℃恒温培养箱中孵育5分钟，观察细胞的解聚情况。
4. 加入等体积的DMEM培养基，用移液器轻轻吹洗细胞，使细胞悬浮。
5. 加入等体积的冻存液（含10% DMSO），使细胞密度约为1×10^6/mL。
6. 将细胞悬浮液转移到冻存管中，标注细胞株的名称、日期和细胞密度。
7. 将冻存管迅速放入-80℃冰箱冻存，随后转移到液氮罐中保存。
六、细胞检测
1. 使用显微镜观察细胞的形态和数量。
2. 利用细胞计数板或细胞计数仪对细胞进行计数，以确定细胞的密度。
3. 使用染色技术（如细胞周期分析、免疫荧光染色等）对细胞进行进一步的检测。
七、实验应用
HCT116细胞株可用于多种实验应用，如细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等的研究，以及药物筛选和基因功能研究等。
我们了解了HCT116细胞株的培养步骤，包括细胞解冻、细胞培养、细胞传代、细胞冻存、细胞检测和实验应用等。正确地培养HCT116细胞株将为癌症研究提供有力的工具和平台。
